袁艳丽，韩衍青，李新丽，刘 成，蔡英杰
(江苏省理化测试中心，江苏 南京 210042)
亚硝酸盐是食物中毒最多的原因之一，过量的亚硝酸盐摄入会引发人中毒、致癌、甚至死亡[1]。口服补液盐散适用于各种病因和各年龄段患者的腹泻治疗，是世界卫生组织要求各国使用的腹泻治疗首选药物，其主要成分有氯化钠、枸橼酸钠、氯化钾和无水葡萄糖[2]。配方里的盐成分，可能会引入亚硝酸盐，有的厂家将其限量控制在2 mg/kg。常用的亚硝酸盐的测定方法有分光光度法和离子色谱法[3]。离子色谱法测定亚硝酸盐不需要衍生，因此常做为亚硝酸盐测定的首选方法[4-6]。但采用离子色谱-电导检测器法测定亚硝酸盐时，由于口服补液盐散中氯离子含量较高，会严重干扰和氯离子保留时间靠得很近的亚硝酸根离子的测定。经过多次预试验发现采用脱氯的前处理方法会造成痕量亚硝酸根的回收率偏低，本文拟采用分光光法来测定口服补液盐散中的亚硝酸根，并进行了相关方法学验证。
1.1 仪器与试剂
仪器：Cary50紫外可见分光光度计，美国瓦里安；
KQ-400KDE超声器，昆山市超声仪器有限公司。
试剂：对氨基苯磺酰胺(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；
盐酸N-(1-萘)-乙烯二胺(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；
1000 mg/L水中亚硝酸根标准品(北京坛墨质检科技有限公司)；
纯水(实验室自制)；
口服补液盐散(II)由某制药公司提供。
1.2 仪器条件
检测波长540 nm；
石英玻璃皿：3 cm。
1.3 标准曲线的绘制
1.3.1 对氨基苯磺酰胺溶液(10 g/L)
称取5g对氨基苯磺酰胺，溶于350 mL盐酸溶液(1+6)中，用水稀释至500 mL。
1.3.2 盐酸N-(1-萘)-乙烯二胺溶液(1.0 g/L)
称取0.5 g盐酸N-(1-萘)-乙烯二胺溶于500 mL水中，储存于棕色瓶中。
1.3.4 NO2-标准工作溶液配制(0.33 mg/L)
1.3.5 标准系列溶液的配制
1.3.6 标准曲线的制作
1.4 供试品溶液的制备
精密称取2.0 g口服补液盐散(III)至250 mL容量瓶中，用纯水溶解并稀释至刻度，摇匀后，准确移取50 mL至50 mL比色管中，然后，加入1 mL对氨基苯磺酰胺溶液(10 g/L)，摇匀后放置5 min，加入1.0 mL盐酸N-(1-萘)-乙烯二胺溶液(1.0 g/L)，立即混匀，20 min后，于波长540 nm处，用3 cm比色皿，测定吸光度。
1.5 定量方法
口服补液盐散(II)中的亚硝酸根含量结果，采用外标法定量。计算公式如下：
X =5 m1/m(其中，X-样品中亚硝酸根(NO2-)的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
m1-从校准曲线上查得的试管中亚硝酸根(NO2-)的质量，单位为微克(μg)；
m-样品的称取量，单位为克(g)；
5-稀释倍数。)
2.1 线性关系
图标准曲线图
表1 标准系列溶液的吸光度
2.2 检测限和定量限
以添加标准工作溶液为0 mL的标准溶液为空白溶液，依法经过重氮偶合应后，连续测定21次。按照LOD = 3.3 δ/S、LOQ =10 δ/S公式计算检测限和定量限。式中LOD：检测限；
LOQ：定量限；
δ：响应值的偏差；
S：标准曲线的斜率。21次空白测定的吸光度响应值的偏差δ为0.000131，标准曲线的斜率S为0.0666，因此LOD=3.3 δ/S=0.006491 μg，LOQ=10 δ/S=0.01967 μg。称样量为2.0 g，定容体积为250 mL时，每50 mL溶液中含样品0.40 g，因此折算到样品中，方法的检测限为0.0162 mg/kg，定量限为0.0492 mg/kg。
2.3 重复性试验
表2 重复性实验结果 mg/kg
2.4 回收率试验
回收率实验同重复性实验。以重复性实验的数据结果来计算回收率。结果见表3，回收率在97.12%～100.40%，平均回收率为99.06%。
表3 回收率试验数据
2.5 稳定性试验
表4 稳定性试验结果
由表4数据可知，2h内测定方法结果的RSD=1.83%，因此，供试品溶液2h内放置稳定，溶液稳定性良好。
2.6 耐用性试验
分别改变分光光度计的检测波长为538 nm及542 nm，并按重复性试验的方法配制样品溶液，按照改变后的条件，进行样品溶液的测试，每个条件进行三次平行测定，并与重复性试验结果进行比较，结果见表5。改变波长后的6次测定与重复性实验数据的RSD=1.15%，耐用性试验结果良好。
表5 耐用性试验结果
采用分光光度法测定口服补液盐散中的亚硝酸根含量，方法的线性、检出限、重复性、回收率等均得到了满意的结果，方法简单易操作，可以为口服补液盐散中亚硝酸根含量的检测提供一种参考方法。
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